4联疗法治疗(4联疗法治疗幽门螺旋杆菌)

面对全球SARS-CoV-2变异株的流行，能否应对突变株成为目前国内外新冠疫苗研发关注的核心问题，对疫苗的保护有效性和持久性也提出了更高的要求。

目前，我国采用的疫苗开发技术路线已经达5种，分别是灭活病毒疫苗、腺病毒载体疫苗、重组蛋白疫苗、减毒流感病毒载体疫苗、mRNA疫苗。灭活病毒疫苗已经得到大范围接种，而陈薇院士团队和康希诺公司合作研发的五型腺病毒载体疫苗，以及中科院微生物所和安徽智飞生物合作研发的RBD Dimer重组蛋白亚单位疫苗均已获批上市。

为什么做细胞免疫评价？

此前，在疫情紧急、疫苗稀缺情态下，中和抗体等体液免疫水平的应答是新冠疫苗评价免疫原性的必选指标。随着多种技术路线疫苗的不断上市，疫苗激活的细胞免疫效价——作为疫苗疗效评价的一项重要指标，在当前上市的疫苗评价临床报告中已多次提及，在今后新冠疫苗的上市审核过程中，势必会得到越来越多的关注。

对于目前备受关注的mRNA疫苗研发而言，更是如此。去年国家药监局发布的《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则》就已明确指出，针对mRNA疫苗除了评价其体液免疫的生物活性以外，也建议对其进行细胞免疫的生物活性评价，如利用细胞因子Elispot检测评价特异性CTL反应等方法进行细胞免疫效价的评价。

细胞免疫应答的相关知识

机体内特异性免疫应答包括体液免疫和细胞免疫2种方式。

细胞免疫应答依赖于T淋巴细胞与抗原提呈细胞的作用。根据T淋巴细胞的类型，又分为CD8+T淋巴细胞和CD4+T淋巴细胞两种，两者介导不同类型的免疫应答反应。

CD8+T淋巴细胞为细胞毒性T细胞，它可以通过释放颗粒酶、穿孔素等直接杀伤感染细胞，也可以通过释放多种细胞因子发挥杀伤感染细胞的作用，在免疫应答种起到最直接的作用。

CD4+T淋巴细胞为辅助性T细胞，可以通过释放不同的细胞因子，刺激CD8+T淋巴细胞和巨噬细胞的活化，或者促进B细胞的活化和分化，如下图所示。

细胞因子在机体的免疫应答、免疫调节、肿瘤转移等生理和病理过程中起重要作用。检测免疫细胞所分泌的细胞因子可反映细胞的功能状态，亦是临床上探索疾病发病机制、判断预后和考核疗效的指标，因此在疫苗评价中细胞因子的检测是一项很重要的反映细胞免疫功能的指标。

细胞免疫评价的方法

免疫学方法直接检测细胞因子的含量，是评价疫苗诱导的细胞免疫应答最常用的检测方法。酶联免疫斑点试验（enzyme linked immunospot assay， ELISPOT），基于流式检测为基础的胞内因子染色（intracellular cytokine staining，ICS），最常用于疫苗的细胞免疫评价。

诺唯赞提供新冠疫苗细胞免疫评价服务

服务优势

1. 技术优势：

a.同时拥有【ELISpot】和【ICS】两种细胞免疫评价技术，只需20毫升就可以同时满足两项技术的试验要求。

b.团队具有丰富的检测经验，检测方法都经过方法学验证，试验结果安全可靠。

2. 样本处理优势：

a.客户只需提供新鲜血液。快速完成PBMCs抽提，保证制备的PBMCs的质量和活率；

b.针对冻存3个月的PBMCs，复活效率高达90%以上。

3. ELISpot平台优势：

a.最早搭建好新冠疫苗检测服务平台，进行过方法学验证;

b.检测通量高，检测灵敏度高。

4. ICS平台优势：

a.满足新冠疫苗细胞免疫评价的常规细胞因子检测

b.检测通量高达150个/天，检测灵敏度高。

c.有能力协助技术分析（需另外收费）

服务内容

基于ELISpot和ICS的细胞免疫检测

a.ELlSpot(IFN-v、TNF-a、IL-2、IL-4、lL-5、IL-13)

通过ELISpot分析疫苗免疫后的T细胞免疫效果

b.ICS(IFN-v、TNF-a、IL-2、IL-4、IL-5、IL-13)

利用3激光10色流式细胞仪,检测疫苗免疫后的T细胞免疫,分析Th1和Th2比例

提供快速且高通量的疫苗临床前体外及动物试验评价服务

1、基于报告基因法/ELISA法的体外抗原表达量评测

a. 单报告基因检测试剂(Bio-Lite Luciferase Assay System)

b. 新型冠状病毒S/RBD蛋白检测试剂盒

2、小鼠的非GLP临床前快速高通量动物疗效和初步安全性评价

在最短时间内，利用常规小鼠品系，高通量完成不同疫苗方案的体液免疫和细胞免疫的疗效评价，为客户通量筛选疫苗方案提供高效支撑。

3、基于ELISpot和ICS的细胞免疫检测

a. ELISpot (IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-13)

通过ELISpot分析免疫后的T细胞免疫效果

b. ICS (IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-13)

利用3激光10色流式细胞仪，检测免疫后的T细胞免疫，分析Th1和Th2比例

4、基于ELISA的体液免疫评测

a.受试动物血清样本的中和抗体检测

b.受试动物血清样本的IgG总抗检测

c.受试动物血清样本的IgG分型检测

d.受试动物血清样本的IgA检测

e.受试动物血清样本的IgM检测

5、基于记忆B细胞分析的免疫持久性和广谱性研究

受试动物样本的IgG记忆B细胞分析

6、基于新冠假病毒系统的中和活性评测

诺唯赞新冠假病毒系统可用于基于细胞水平的疫苗血清学评价。该病毒系统以携带荧光素酶报告基因的(HIV-1或VSV)为病毒骨架，同时在病毒外壳表达新冠病毒Spike蛋白，形成的假病毒颗粒感染内源或外源性表达ACE2的细胞系，高度模拟了新冠病毒通过Spike-ACE2对目的细胞的入侵过程，该病毒颗粒感染目的细胞的程度与基于荧光素酶的发光值呈正相关，与抗体的中和活性呈负相关。

a. 提供产品

1.单点突变假病毒共40株

2.英国/南非/巴西/美国/尼日利亚/印度等全突变假病毒

3.单报告基因检测试剂(Bio-Lite Luciferase Assay System)

b. 服务内容

1. 检测血清样本的中和活性

2. 提供对照标准品

经真病毒试验验证的具有再生元同等效力的康复者来源的全人源中和抗体作为对照标准品

3. 定制开发假病毒

根据客户需求，定制开发含有不同突变位点的假病毒

新冠疫苗临床研究的体液免疫和细胞免疫评测服务

1、基于HIV和VSV的假病毒系统中和活性检测

2、基于ELISA的体液免疫评测

a.新冠疫苗临床样本的中和抗体检测

b.新冠疫苗临床样本的IgG总抗检测

c.新冠疫苗临床样本的lgG分型检测

d.新冠疫苗临床样本的IgA总抗检测

3、基于ELISpot的体液免疫评测

a.新冠疫苗临床样本的IgG记忆B细胞分析

4、基于ELISpot和ICS的细胞免疫检测

a.ELlSpot(IFN-v、TNF-a、IL-2、IL-4、lL-5、IL-13)

通过ELISpot分析疫苗免疫后的T细胞免疫效果

b.ICS(IFN-v、TNF-a、IL-2、IL-4、IL-5、IL-13)

利用3激光10色流式细胞仪,检测疫苗免疫后的T细胞免疫,分析Th1和Th2比例

疫苗上市后的免疫效果检测

中和抗体检测的经典方法是噬斑减少病毒中和试验(Plaque Reduction Neutralization Test, PRNT)。此方法涉及活病毒和细胞的培养,对生物安全级别要求高(需要在P3实验室完成),且操作复杂、检测通量低,使其大范围开展受到限制。

使用诺唯赞开发新冠假病毒检测产品和新冠中和抗体ELISA检测试剂盒(Anti-SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody ELISA Kit)，可以满足进行疫苗大规模接种后免疫效果监测和保护力评估的需求。

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