4岁男孩红细胞4.16正常吗(四岁孩子红细胞正常值)

胸腺内供体脾细胞注射诱导大鼠皮肤移植免疫耐受

陈 凡●

（南京铁道医学院附属医院胸心外科 南京 210009）

宋惠民 李跃华 许复郁∗∗ 徐巨林

（山东医科大学附属医院心外科‚∗∗病理科 济南 250012）

目的：观察非紫外线处理供体脾细胞经胸腺途径透导免疫耐受对同种异体移植皮瓣存活的影响。方法：将大鼠随机分成两组‚每组14只‚对照组单纯作皮肤移植‚实验组在移植前8d 作胸腺内脾细胞悬液注射。结果：实验组皮肤移植存活时间明显延长‚红细胞免疫反应及迟发性超敏反应未见明显增强‚与对照比较差异显著。结论：非紫外线处理供体脾细胞经胸腺途径也能诱导出较高程度的移植免疫耐受‚ MHC－Ⅱ抗原并不影响耐受诱导。

关键词 胸腺；供体脾细胞；皮肤移植；移植免疫耐受

器官移植是某些终末期心脏疾病的唯一治疗手段‚虽然 CsA 和 FK 506等免疫抑制剂的应用使急性排斥得到了比较满意的解决‚但它有难以避免的副作用‚长期大量使用将致肝肾功能损害、免疫功能受损‚ 而且也不可能完全避免排斥‚尤其对体液免疫和抗原间接提呈导致的慢性排斥不但无效‚反而有促进作用［1］ ‚这已成为进一步提高病人远期存活的巨大障 碍。既能使移植物长期存活‚又不损害宿主免疫功能的理想方法之一是诱导宿主对移植器官的特异免疫耐受。本实验用供体脾细胞宿主胸腺内注射诱导免疫耐受‚观察它对移植皮瓣存活的影响。

1 材料和方法

1.1 实验方法

1.1.1 动物 纯种 Wistar 大鼠‚4月龄‚雄性‚作皮肤移植受体‚SD 大鼠（二者均由山东医科大学实验动物中心提供）‚3月龄～4月龄‚雌雄不限‚作皮肤及脾细胞供体。

1.1.2 脾细胞悬液制作及活力检测 方法见参考文献［2］。

1.1.3 宿主胸腺内供体脾细胞悬液注射 皮肤移植前8d 宿主胸部去毛消毒‚上胸骨段正中部分剪开‚直视下每侧胸腺注射脾细胞悬液0．2ml‚共2×107 个脾细胞。

1.1.4 皮肤移植 于胸背部右侧移植2cm ×2cm 供体全厚皮瓣‚胸背部左侧移植相应大小自体皮瓣作对照‚仔细剥除皮瓣下肌肉‚术毕外敷青霉素干粉0．2g。

1.1.5 分组 A 组单纯作皮肤移植‚B 组在移植前8 d 作胸腺内脾细胞悬液注射。每组各14只大鼠。

1.2 观察指标

（1） 皮肤存活情况。皮肤存活表现为粉红、皮薄、

质柔软‚排斥表现为增厚变硬、色暗红、点状发黑。

（2） 皮肤移植后第7天切取部分移植皮片常规病理切片检查‚HE 染色。

（3） 皮肤迟发性超敏反应（DT H） 诱导‚于皮肤移植后第8天进行‚方法见参考文献［3］。

（4） 红细胞免疫功能测定。皮肤移植前及移植后第7天至第8天‚取鼠尾血0．5ml 肝素抗凝‚用酵母菌花环法测红细胞 C3b 受体（RBC－C3b）花环活性和红细胞粘附免疫复合物能力（RBC－IC 花环）。

1.3 统计学处理

数据均用 -x ± s 表示‚两样本均数比较用 t 检验。

2 结 果

2.1 各组皮片移植后存活情况

A 组皮肤移植后3d～4d 开始脱水干燥‚增厚变硬‚色深红‚部分区域点状发黑‚7d 后整皮片完全干缩坏死‚发生急性排斥的平均时间为4．16d。第7天切取病检见皮片坏死严重‚结构层次不清‚表皮片层状脱落。B 组移植后第4天皮色尚红润‚有弹性‚薄而软‚7 d 后部分区域脱水‚色深红‚皮稍厚变硬‚12d 以后干缩坏死脱落。发生排斥反应的平均时间为9．4d。两组比较差异显著（ P＜0．01）。第7天切取病检见皮肤层次清楚‚附件结构清晰‚有皮肤细胞变性及角质层脱

图1 A 组皮肤移植后7d 病检 10×20

HE 染色

1.1 红细胞免疫功能改变

A 组皮肤移植后7d～8d 红细胞免疫功能明显升高‚与正常大鼠比较差异显著；B 组无明显升高‚与对照比较差异不显著（附表）。

2．3 DT H 在 A 组为（1．695±0．345） mm‚在 B 组为（0．632±0．24） mm‚统计处理示差异显著（ P ＜ 0．01）。

3 讨 论

近来研究表明‚人及动物胸腺在成年后仍对机体 免疫功能的维持起重要作用。骨髓来源的前 T 细胞在胸腺特殊的微环境中发育成熟时接触某一异型抗原后‚发生阳性选择‚进入外周血后便会对该抗原产生特异免疫耐受［4］ 。据此国外报告‚向胸腺内介入供体 MHC－Ⅰ抗原‚能特异性地延长移植器官存活期‚包括心、肝、肾、小肠等［5］ 。在耐受研究中‚皮肤移植作

为耐受程度的指标具有特殊的意义。它的树突状细胞及淋巴细胞分布、血管与宿主连接的特殊性‚使同种异体皮肤移植成为最难获得耐受的组织‚因而也成为研 究耐受状态与深度最可靠的指标。国外大多数耐受研究显示‚皮肤移植存活只能获有限延长‚而且是建立在 大量非特异免疫抑制处理和静脉输入供体骨髓建立嵌落‚未见细胞浸润（图1‚2）。自体皮瓣移植后存活良好‚无排斥反应发生。

图2 B 组皮肤移植后7d 病检 10×20

HE 染色

合体的基础上［6］ 。本实验A 组皮肤移植后4d 开始受排斥‚第7天已完全被排斥‚病检显示正常皮肤结构已完全消失‚而此时 RBC 免疫及DT H 均显著升高‚表明这种皮肤移植已使大鼠致敏‚因皮肤富含 MHC－Ⅱ阳性树突状细胞及多态性的与移植排斥相关的同种抗原‚其免疫信息传递是中枢致敏型‚致敏效率很高‚能激发激烈的细胞免疫反应［7］ 。B 组皮肤移植存活延长虽也很有限‚但较 A 组却明显延长‚病检皮肤层次结构仍清晰可辨‚而 RBC 免疫和DT H 却无明显升高‚表明耐受诱导是成功的‚在细胞免疫方面皮片未完全成 为致敏原使大鼠致敏‚而且这种耐受未建立在使用免 疫抑制剂及建立嵌合体基础上‚可见经胸腺途径诱导 的中枢耐受较之经静脉途径建立的周围耐受有较高的 致耐性。结果还显示 MHC－Ⅱ抗原并不影响耐受诱导‚因所用的供体脾细胞未经过紫外线处理［8］ 。

参 考 文 献

1 Emeson EE．Shen ML ．Accelerated atherosclerosis in hyperlipi- demic C57BL／6 mice treated with cyclosporine A．Am JPathol‚1993‚142：1906

2 马绪娴．供移植用同种脾细胞悬液制作及活力检测法．中华器官移植杂志‚1990‚11：146

3 叶建平．成年小鼠移植耐受的实验研究．中华器官移植杂志‚1992‚13：21

4 Goss JA‚Nakafuse Y‚Yu S．Intrat hymic injection of donor al- loantigens induces specific tolerance to cardiac allografts．T rans- plantation‚1993‚56：166

5 Oluwole SF ‚Chowdhury NC‚Faw waz RA．Induction of donor specific unresponsiveness to rat cardiac allografts by intrathymic injection of UV －B irradiated donor spleen cells．T ransplanta- tion‚1993‚55：1389

6 Wood ML ‚Monaco AP ．T he effect of timing on skin allografts on subsequent survival in ALS－treaeted marrow infused mice． T ransplantation‚1977‚23：78

7 Smith RN‚Robinson AV ．Multiple pathways in the rejection of skin grafts．J Surg Res‚1992‚52：413

8 Oluwloe SF ‚Chowdhury NC‚Faw waz RA．Induction of donor －specific unresponsiveness to rat cardiac allografts by pretrea- ment with intrathymic donor MHC class I antigens．T ransplan- tation‚1993‚55：1396

（收稿日期：1996－10－11） （英语摘要见P ．170）