老人谷氨酰转肽酶410正常吗(谷氨酰转肽酶410严重么)老人谷氨酰转肽酶410正常吗(谷氨酰转肽酶410严重么)
基于生物表面活性剂和酶的羊毛防毡缩处理
HighlightsBacilluspatagoniensis叠加在聚合酶链酶下的浓度。这有利于蛋白酶作用在羊毛表面，减少其毡缩倾向。表面活性剂预处理增强了蛋白酶的抗毡缩作用.这种组合处理减少了毡层的毡层，而没有失去抗拉强度。这种环保型工艺适用于有机羊毛加工.抽象的，理论上的低环境影响的防毡缩工艺对于改善羊毛纤维的性能是很重要的，特别是如果纤维是面向有机市场的话。本研究的目的是评估 e蛋白水解酶，单独或与枯草芽孢杆菌O9生物表面活性剂(表面活性剂)联合使用，可减少美利诺羊毛的毡缩。不同浓度的细胞外蛋白 芽孢杆菌(Bacillussp.)用G51和Patagoniensis PATO5T对羊毛进行处理。如毛毡球测试结果所示，羊毛毡缩倾向显著下降的是阿奇。 VED分别使用PATO5T和G51蛋白酶的50和150个酶单位(EU)/g羊毛。这两种处理都没有引起羊毛抗拉强度的显著下降。增加了一个预-Trea 在临界胶束浓度(CMC)以上，加入表面活性剂表面蛋白，进一步降低了羊毛的毡缩倾向。生物表面活性剂预处理的组合 经Patagoniensis PATO5T蛋白酶处理后，毡球密度最小(0.049±0.004 g/cm3)，抗拉强度无明显损失。在PATO5T蛋白水解e中 酶聚合≥100 kDa约占蛋白水解活性的50%。这可以降低蛋白酶在羊毛纤维中的扩散速度，促进蛋白酶在羊毛表面的作用。协和 据我们所知，这是第一份报告，证明了生物表面活性剂在环境友好的过程中，旨在减少羊毛毛毡。1. 介绍
羊毛工业加工包括精练、梳理和精梳步骤，产生平行的羊毛条，称为\"顶部\"(Gilligan，2004年)。最广泛的给人感觉遗尿的治疗方法 到顶部是一个连续的过程，包括一个氧化步骤(氯化)，目的是去除羊毛鳞片的脂层，软化它们的边缘，提高羊毛的润湿性(Kettlewel)。 L等人，2015年)。接下来，一种聚合物(如聚酰胺/表氯丙烷树脂，Hercosett)被粘合在一起，以掩蔽鳞片，防止对羊毛毡缩造成的摩擦效应(Rippon和Evans，2012年)。e 这一过程的产物中含有氯化物与羊毛反应产生的有害副产物，这些化合物统称为可吸附的有机卤化物(AOX)，(Dee)。 Fry等人，1983年)。因此，连续氯气Hercosett生产线的典型废水含有35-40毫克/升的AOX(Kettlewell等人，2015年)。对人类健康和环境的有害影响 由于AOX的释放受到不同国家立法的控制，\"斯德哥尔摩公约\"选择的几种持久性有机污染物是AOX化合物(谢永华等人)， 2017年)。此外，全球有机纺织品标准(Gots)禁止对有机羊毛进行氯化处理，这突出表明迫切需要为羊毛顶部开发可接受的抗毡层工艺(GOT)。 S, 2017).
作为氯处理的生态友好型替代品，蛋白酶、脂肪酶、角质酶和转谷氨酰胺酶等酶已被研究用于羊毛防毡缩处理(Shahid E)。 (t al.，2016)。特别是，蛋白酶可以降解羊毛鳞片，赋予毛毡抗逆性(Kettlewell等人，2015年)。蛋白酶活性及其在羊毛防毡缩处理中的作用 主要取决于反应的pH值、蛋白酶浓度、孵育时间和羊毛特性(KaurandChakraborty，2015)。然而，某些基于蛋白质的治疗 SES对羊毛毡层的作用有限(El-Sayed等人，2001年)。这可能是由于外层的高度交联结构和羊毛的共价附脂所致。 Cales，这限制了蛋白酶的作用(沈，2010年)。此外，蛋白酶可能扩散到羊毛纤维内部，造成韧性丧失(Araújo等人，2009年)。抵消这种不受欢迎的影响 利用化学(如过氧化氢)或生物(如角质酶)分子对羊毛纤维进行降解预处理，已被应用于羊毛表面的改性和蛋白水解作用的增强。 n它(Wang等人，2009年；Senthilkumar等人，2015年)。特别是，表面活性剂可以通过完全或部分去除羊毛角质层最外层的脂层来发挥重要作用(Kauret al.，2016) 。然而，根据现有证据，表面活性剂在羊毛酶促处理中的作用存在差异。例如，张等人。(2006)报告一项负离子替代物 以乙氧基化烷基磷酸酯为基础的蚂蚁和以线性乙醇乙氧基化物为基础的非离子表面活性剂有助于减少蛋白酶处理羊毛的收缩，可能是通过减少表面张力来实现的。 提高羊毛的润湿性。相反，Nolte等人。(1996)观察到，表面活性剂可以从羊毛纤维中去除蛋白质片段，从而降低其束强度。而且，治疗前 T与十六烷基三甲基溴化铵(Ctab)一起被证明能抑制酶的活性(可能是由于羊毛吸附ctab)，因此需要添加一个与阴离子素一起清洗的步骤。 首席执行官(Smith等人，2010年)。与合成表面活性剂相比，生物表面活性剂(生物源表面活性剂)具有生物降解性强、化学结构多样性高等优点。 在极端pH、盐度和温度条件下，可再生能源生产的潜力和更高的效能(Olivera和Nievas，2010年)。因此，生物表面活性剂表现出POTEN。 TiAl用于许多环境和工业应用(MarchanandBanat，2012年)。尽管如此，它们在羊毛加工中的应用还没有得到充分的探索，而且大多数相关的研究都倾向于 重点是毛料的精练。Bozaci(2017)报道，植物源性生物表面活性剂皂甙对羊毛精练是有效的。Leighs等人也发现了皂甙。(2018)与 壬基苯氧基聚氧乙烯合成表面活性剂，用于毛料的工业精练。此外，Jibia等人。(2018)最近观察到鼠李糖脂生物表面活性剂的效率 脱脂的原毛，使它更容易受到微生物降解。
然而，生物表面活性剂在羊毛防毡缩整理中的应用一直未见报道.在此之前，我们分离到了海洋细菌枯草芽孢杆菌O9，它产生了强大的生物保护作用。 在蔗糖上生长蚂蚁表面蛋白(Morán等人，2000年；Olivera等人，2000年)。表面素是由枯草杆菌产生的脂肽，由内酯键连接的七肽组成。 含13-15 C原子的β-羟基脂肪酸(Peypoux等人，1999年)。本研究的目的是评估蛋白水解酶的潜力，单独或与枯草芽孢杆菌O9生物表面活性剂联合使用。 减少美利奴羊毛顶部毡层。蛋白降解细菌，芽孢杆菌。G51和嗜极芽孢杆菌Patagoniensis PATO5T被用作酶的来源(Olivera等人，2005年；Iglesias等人， 2017年)。除了禁止羊毛氯化，GOTS(2017)还禁止在有机纺织品加工中使用来自转基因生物的酶。因此，这部小说的防毡缩 基于生物表面活性剂和野生细菌产酶的工艺不仅提高了羊毛纤维的性能，而且满足了有机羊毛生产的要求。
2.材料和方法2.1.微生物培养本研究所用的蛋白酶产生微生物为芽孢杆菌(Bacillussp.)G51和B.patagoniensis PATO5T.G51菌株以前是从巴塔哥尼亚梅里诺羊毛(Iglesias等人，201)中分离出来的。 (7)耐盐性嗜碱B.patagoniensis PATO5T来源于阿根廷巴塔哥尼亚蒙特纳的Atriplex Lampa根际(Olivera等人，2005年)。用于生产蛋白酶，Bacillu Ssp.G51生长于含(g/l蒸馏水)脱脂乳12.5、酵母膏3、NaCl 5(pH7.8)的液体培养基中。用液体培养基培养澳门白僵菌PATO5T(G) 大豆粉10，酵母膏1，NaCl 50，Na2CO310.6(PH 10)。将装有100毫升相应液体培养基的Erlenmeyer瓶(500毫升)接种于隔夜培养。 G51或PATO5T的ES值为1%(v/v)。G51培养在30℃和200 rpm下孵育72h(Iglesias等人，2017年)，PATO5T培养在25℃和200 rpm下孵育72h(Olivera et.) al., 2006).2.2.蛋白水解萃取物生产G51和pATO5T培养物分别在4°C和16，200 g下离心10 min，用3体积冷丙酮(−20°C)沉淀培养上清液。 轻轻搅拌，在20°C条件下将悬浮液沉降至少1小时。离心(4°C，16，200g，10分钟)后，在50mMTris-HCl缓冲液(pH8.0)中重新溶解颗粒， 所得提取物可作为蛋白水解酶的来源。2.3.蛋白水解活性用以酪蛋白为底物的Sigma非特异性蛋白酶活性测定法测定了酶提取物的蛋白水解活性(Cupp-Enard，2008年)。蛋白酶活性释放酪氨酸 从酪蛋白中提取的氨基酸和肽片段。Folin-Ciocalteu试剂与游离酪氨酸反应生成蓝色发色团.简单地说，反应混合物中含有1.1毫升的氧。 F1%(w/v)酪蛋白(Sigma)在0.1M Tris-HCl缓冲液(pH8.0)和0.1ml酶提取物(按2.2中所述)中。反应在45°C下进行，加入5%后终止。 (W/V)三氯乙酸(TCA；1.8 ml)。对照组以同样的方式处理，除在酶提取物前添加TCA外。允许反应物在4°C下停留30℃ 10，000 g离心10 min。上清液0.25 ml与0.5 M Na2CO3和0.25 ml Folin-Ciocalteu试剂混合。混合物是在 37℃，30 min，允许显色，随后在λ=660 nm处测定其吸光度(JENWAY分光度计6320 D，联合王国)。将吸光度值与标准进行了比较。 曲线是由已知数量的酪氨酸与Folin-Ciocalteu试剂反应得到的，它允许吸光度的变化与在μm ol(Cu)中表达的酪氨酸量相关。 PP-Enard，2008年)。计算结果为三个独立副本的平均值。一个酶单位(EU)被定义为酶的数量，在测定中释放1μmol酪氨酸/min。 （居住、工作或做事情的）环境.2.4.利用蛋白酶处理羊毛纤维2.4.1.实验室试验约1.1g美利奴羊毛顶部(19.4μm)浸入含50 mm Tris-HCl缓冲液(pH8.0)和5 mm CaCl 2的浴中(质量/液体比为1：20)。酶和浓度 不同处理分别为：G51蛋白水解提取物(100、150和300 EU/g羊毛)、PATO5T蛋白水解提取物(50、100和300 EU/g羊毛)和Esperase 8.0 l Sigma(100和300 EU/g羊毛)。协和 还进行了不含酶的对照，并对每个处理的5个独立副本进行了处理。所有处理均在45°C和30 rpm下进行1h(Iglesias等人，2017年)。印后 酶经70℃加热5 min后，去除羊毛纤维，用5 ml自来水冲洗两次，风干。松羊毛可毡性测定 Ng a改良的亚琛毡试验(肯扬和韦翰，1999年)。毛毡球直径记录三次(第一次测量后水平旋转，第二次测量后垂直旋转)， d获得的数值平均，以补偿可能偏离圆度(IWTO-20-04，2004年)。然后，计算毛毡球密度(IWTO-20-04，2004年).毛毡的增加- 球的直径，以及毛毡-球密度的下降，表明毡的倾向减少(反之亦然)。根据ASTM D 1294-05(2013)测定了羊毛纤维的抗拉强度。 用JEOL JSM 6460LV扫描电子显微镜(JEOL，日本)对羊毛纤维进行扫描电镜(SEM)鉴定。2.4.2使用染色设备的试验根据实验室试验结果，我们测试了两种织物染色设备中羊毛处理的更有效蛋白酶浓度。因此，进行羊毛酶处理。 这是一台Labomat BFA-12装置(瑞士马塞)，使用的烧杯(500毫升体积)，纱架的质量/液体比为1：20。羊毛顶部(19.4μm)在50 mm Tris-HCl中平衡。 在室温下浸泡10 min，以3°C/min的速率升温，直至处理温度达到45°C。当时，5毫米CaCl 2和TH E酶提取物(G51为150 EU/g羊毛，PATO5T蛋白酶为50 EU/g羊毛)，处理时间为5 rpm和45°C，处理时间为40 min。羊毛顶部也被处理在一个泥泞的HVF应用程序中。 Ratus(瑞士马西斯)。在此处理中，顶部样品浸泡在酶浴(50 mm Tris-HCl缓冲液，pH 8.0，含5 mm CaCl 2)中，其中含有G51(150 EU/g羊毛)或PATO5T(50 EU/g羊毛)。 Ees(质量/液体比为1：20)，通过双辊泥浆，速度为0.033 m/s，浸渍步骤压力为0.5巴。其次是羊毛样品。 45°C在烤箱中加热1h。经Labomat或Foulard处理后，酶在70℃下加热5 min，除去羊毛纤维，用5毫升水龙头漂洗两次。 特，还有风干。毛毡球的直径和密度，以及抗拉强度，如第2.4.1节所述.没有酶的对照组也进行了处理，并进行了5个独立的复制。 每次治疗均进行。2.5.生物表面活性剂和蛋白酶处理羊毛纤维2.5.1.生物表面活性剂制备根据Olivera等人的描述，以粗提物的形式制备了枯草杆菌O9生物表面活性剂(表面活性剂)。(2000年)。简单地说，这种微生物是在含有(g/l)：Sucr的培养基中培养的。 OSE 10、酵母膏5、(NH4)2SO4 1、Na2HPO4 6、KH2PO4 3、NaCl 27、MgSO 4·7H2O 0.6。还添加了一种微量元素溶液(5ml/l)(Meyer和Fietcher，1985年)。在Erlenm进行栽培 含有75毫升生产介质的250毫升容量的Eyer烧瓶。以2%(v/v)的比例在同一培养基上接种隔夜培养，并以160 rpm孵育。 细胞经离心分离(4°C，12，000 g，30 min)，上清液加入6 N HCl调至pH2.0，隔夜放置4°C，然后再离心。 上文所述。球团再悬浮于蒸馏水中，加入2.5N的NaOH，最终pH值为8.0。制备了不同稀释度的粗提物，并测定了表面张力。 用Du NOüy环张力计(阿根廷Decalab S.R.L.)测量。生物表面活性剂浓度在临界胶束浓度(CMC)下表达。 很多表面张力相对于稀释的对数。粗提物中含有700 CMC的生物表面活性剂。一个CMC相当于20毫克/升的表面活性物质(Olivera等人，2000年)。2.5.2.羊毛纤维的生物表面活性剂预处理约1.1g美利奴羊毛顶部(19.4μm)样品放置在含有50 mM Tris-HCl缓冲液(pH8.0)和40 CMC的生物表面活性剂制备液(质量/液比为1：20)中(见2.5.1)。T型 在45°C和30 rpm条件下，在30 min内对羊毛纤维进行脱去，再用5ml自来水冲洗两次。不含生物表面活性剂的对照组 同样的处理和每个处理的5个独立副本被处理。2.5.3.生物表面活性剂预处理羊毛的蛋白酶处理生物表面活性剂预处理羊毛按2.4.1节所述，使用50和150 EU/g的Patagoniensis PATO5T和芽孢杆菌的羊毛。G51蛋白水解提取物(图1)。康 此外，还进行了不含酶的处理，并对每个处理进行了5个独立的复制。毛毡球的直径和密度，以及抗拉强度，如 第2.4.1段。利用光度计HannaHI 83099(美国汉娜仪器)采集工艺废水，测定化学需氧量(epa 410.4；环境磷)。 保护署，1993年)。2.6.Patagoniensis PATO5T蛋白水解活性的表征B.patagoniensis PATO5T蛋白水解提取物，如第2.2节所述，用Am图标Ultra-4离心过滤装置(德国Darmstadt，Merck KGaA)进行超滤。 教官的指示。为此，使用了50和100 kDa超滤膜。培养上清液用Am图标Ultra-4(100 KDa)装置超滤。所有过程都是穿孔的 D一式三份，并对渗透组分和保留组分进行分析，计算蛋白质水解活性(2.3节)。2.7.统计分析用单因素方差分析评价不同处理间拉伸强度、毛毡球直径和密度差异的统计学意义。图基距离试验用于多组比对 毒药。对于未能满足方差分析假设的数据，进行了Man-Whitney检验.用SPSS7.0软件包进行统计分析(NorušIS，1997年)。