一、非洲猪瘟病毒(ASFV)如何破坏免疫系统
非洲猪瘟ASF,顾名思义,是最早在非洲发现的一种危害养猪业的烈性传染病。虽然叫猪瘟,但是跟传统猪瘟完全不一样,在微生物学上有单独的种属。它于1921年首次出现于非洲的肯尼亚。这种病由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种急性、热性、高度接触性、高死亡率传染病,我国将其列入一类动物传染病。可通过航班或港口废弃物、猪肉及其制品、野猪携带病毒和软蜱携带病毒等方式传播。
ASFV严重破坏机体免疫系统,导致特异性和非特异性免疫系统破坏,非洲猪瘟病毒易引起免疫逃逸、免疫破坏。
ASFV对单核-巨噬细胞具有明显的亲和力,由于单核-巨噬细胞是抗原提呈细胞并具有淋巴组织嗜性是其病毒靶细胞,所以ASFV以不同方式进入机体后,可直接或通过血液循环感染局部淋巴组织中的单核-巨噬细胞,通过2-15天孵育大量增殖后 ,再次进入血液 ,吸附于红细胞等血细胞 ,随血液循环感染更多部位的单核-巨噬细胞 ,稍后可进一步感染内皮细胞、巨核细胞、树突状细胞、中性细胞、血小板和肝细胞等多种细胞类型 。
ASFV同其它出血热病毒一样,可导致血管内皮细胞凋亡使血管通透性增加从而在感染后期引起广泛的出血性病变,随后进一步发展成弥漫性血管内凝血 。
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二、ASFV感染的主要宿主细胞及致病机制
巨噬细胞是ASFV感染的主要宿主细胞,病毒主要通过肌动蛋白介导的内吞作用和巨胞饮作用进入巨噬细胞,ASFV主要在巨噬细胞内完成复制、组装以及子代病毒颗粒的释放。
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猪感染非洲猪瘟病毒以后,首先将抑制猪自身分泌Ⅰ型干扰素(干扰素α和β),非洲猪瘟病毒是一种典型囊膜病毒,对Ⅰ型干扰素非常敏感,通过抑制干扰素的抗病毒效应实现在猪体内的巨噬细胞大量增殖,猪感染非洲猪瘟病毒到发病的时间长短取决于非洲猪瘟病毒从感染细胞(巨噬细胞)中排出的数量和体外排出的途径,国外有人做过攻毒试验(格鲁吉亚2007/1型非洲猪瘟高毒力毒株),与国内目前爆发的非洲猪瘟毒株类型高度类似,一般通过接触途径在9-13天之后可以在血液中检测到非洲猪瘟病毒,其传播速度与饲养方式或猪群免疫力紧密相关。
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然后,大量增殖的非瘟病毒开始进入血液循环,促进淋巴细胞和白细胞的凋亡,在感染后将导致超过60%以上的淋巴细胞和50%以上的白细胞死亡,猪的所有淋巴器官中都有非典型形式的淋巴细胞。Post等研究表明T细胞和IL-10的水平与非洲猪瘟造成的死亡有关,王西西等研究发现,延长感染巨噬细胞的存活以及促进临近淋巴细胞的凋亡是非瘟病毒免疫逃逸的 重要机制。
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非瘟病毒会导致血液循环出现障碍,引发组织坏死,在临床上可见发烧、减料、呼吸困难、耳朵发紫、体表出现出血斑等情况,主要原因在于非瘟病毒激活肺巨噬细胞释放IL-1,TNF-a导致内皮细胞受损,引起中性粒细胞聚集,导致血栓形成,同时造成骨髓内的血小板数量急剧减少,影响机体造血机能,诱发猪只休克或猝死。
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非瘟病毒猪瘟诱导猪体产生大量自由基,导致体内出血严重。欧云文(2017,中国兽医学报)等研究发现ASFV释放的氧化自由基致使猪脏器出血和弥散性血管内凝血。
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三、机体如何通过自身三道防线抵御ASFV
关于机体内部环境的控制,动物机体共有三道防线抵御病原入侵:
第一道防线是由皮肤和黏膜构成的,他们不仅能够阻挡病原体侵入体内,而且它们的分泌物(如乳酸、脂肪酸、胃酸和酶等)还有杀菌的作用。呼吸道黏膜上有纤毛,可以清除异物。
第二道防线是体液中的杀菌物质和吞噬细胞,这两道防线是动物在进化过程中逐渐建立起来的天然防御功能,特点是生来就有,不针对某一种特定的病原体,对多种病原体都有防御作用,因此叫做非特异性免疫(又称先天性免疫)多数情况下,这两道防线可以防止病原体对机体的侵袭。
第三道防线是机体的特异性免疫。主要由免疫器官(胸腺、淋巴结和脾脏等)和免疫细胞(淋巴细胞)组成,其中,(抗原呈递细胞)巨噬细胞负责抗原呈递,淋巴B细胞“负责”体液免疫;淋巴T细胞“负责”细胞免疫。具体如下:
当机体内的巨噬细胞遇见这些病原体后,会将它吞噬,然后将这些病原体的碎片(即抗原)在细胞的表面呈递出来,将这些抗原肽呈递出来的巨噬细胞称为抗原呈递细胞,这些抗原呈递细胞能够与识别抗原的辅助T细胞发生相互作用,此时的抗原呈递细胞会释放出一种细胞因子,这种细胞因子(白介素-1)能激活辅助性T细胞,释放出其它细胞因子(干扰素、白介素),可以使得B细胞以及另一种T细胞(细胞毒性T细胞)大量的增殖,免疫应答反应开始兵分两路发挥作用。
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数百万不同种类的细胞毒性T细胞,每一种都可以识别特定的抗原,位于被感染细胞表面的抗原之后,他们会与这些抗原结合,分泌一些化学物质来杀死这些被感染的细胞,这些细胞被杀死,位于它们表面的抗原也会被破坏。
数百万 B细胞也同样可以识别特定的抗原,在辅助T细胞的协助下被激活,分化成浆细胞,生产抗体,这些进入血液循环的抗体,会与特定的抗原相结合,对其进行标记,被标记的抗原会被巨噬细胞所吞噬并破坏。
有一些T、B细胞会变成记忆细胞,并可以在机体内存在长达数10年之久,由于这些记忆细胞的存在,当相同的抗原再次机体时,机体会产生更加迅速且更加强大的免疫应答反应,以保护机体免受这些病原体的再度入侵。
四、非洲猪瘟的综合防控
在非瘟面前,未知事项很多,但防控思路依旧遵循传染病防控的三要素,消灭传染源、切断传播途径、保护易感动物,一直是防控重大疾病的关键步骤。
非洲猪瘟病毒特性:超强的体外生存能力,在血液、粪便和组织中可长期存活,冻肉中存活数年至数十年,未熟肉品、腌肉、泔水中可长时间存活,病毒怕强酸强碱,耐低温不耐高温。
把“动物”看作是一个整体,从动物整体出发,既要怯邪,又要扶正,强调机体自身免疫,通过调整机体免疫力保护易感动物,提高抗病力。没有什么产品能够比得上自身免疫力抵抗病原微生物更有效!
综观ASF的致病机理是ASFV作用于猪的免疫细胞和淋巴细胞,猪的这些免疫细胞自抵御ASFV感染的时候,导致机体产生过多的炎性介质,从而形成眼见的炎性病变,并最终导致T细胞和B细胞数量显著减少。
防控ASFV,激活机体第二道防线至关重要!清除病原、调节免疫、增强抵抗、抵御非瘟。
激活免疫细胞(T细胞、B细胞、巨噬细胞、杀伤细胞、树突状细胞等)和增加免疫细胞数量(如T细胞、B细胞等) ;增强免疫细胞抵抗、消灭入侵机体病茵的能力。
正常情况下,被感染的免疫细胞也分泌活性物质,包括:白细胞介素、干扰素、溶菌酶、细菌素、转移因子、吞噬细胞集落刺激因子、趋化性细胞因子及肿瘤坏死因子等,可以消灭那些突破第一道防线和第二道防线的病毒和细菌,但前提条件是:机体可以产生足够多的活性物质。很多非特异性免疫力低下的猪只,由于无法分泌足量的活性物质,导致猪只出现大量发病和死亡,全身主要脏器受损严重。
因此如何避免感染发病,健康猪群添加细胞因子产品(如:白细胞介素-4、干扰素)以及转移因子能缓解炎性粒子对机体、器官的损伤和危害。
白细胞介素-4(IL-4)其主要作用是促使抗原或丝裂原活化的B细胞分裂增殖,能促使静止的B细胞表达MHC-2类分子和分泌IgE,增强B细胞的抗原递呈能力,因此也称为B细胞刺激因子。其次IL-4也是辅助性T细胞(CD4+T细胞)的自分泌性生长因子;此外,IL-4还能促进细胞毒性T细胞的活性,可增强巨噬细胞的功能;同时巨噬细胞递呈抗原的能力及对肿瘤细胞的细胞毒素作用也显著增强。
可维持和促进肥大细胞的增殖,促进骨髓造血前体细胞的增殖,诱导髓样细胞定向分化;诱导内皮细胞表达血管细胞粘附分子-1(vcam-1),对淋巴细胞的迁移具有一定意义。
干扰素能干扰病毒在猪体内复制以及其具有免疫监视功能,使机体及时的能监视病毒和抵抗病毒的感染;当病毒DNA或RNA与宿主细胞核糖体结合,激活干扰素编码基因,表达干扰素;干扰素激活翻译抑制蛋白TIP基因,表达病毒翻译抑制蛋白(TIP),TIP可以和宿主细胞核糖体结合,从而阻断病毒DNA或RNA与宿主细胞核糖体结合,进而起到阻断或干扰病毒复制的过程。同时,干扰素也可增强NK细胞对病毒感染细胞和肿瘤细胞杀伤,活化巨噬细胞。
转移因子Transfer Factor (TF) ,又称传输因子,是机体白细胞中有免疫活性的T淋巴细胞在抗原或丝裂原的刺激下所释放的一类可透析的小分子多肽和核苷酸复合物,也是一种能够转移免疫致敏信息的淋巴因子,为细胞免疫促进剂。
转移因子携带有致敏淋巴细胞的特异性免疫信息,能够将特异性免疫信息递呈给受体淋巴细胞,使受体无活性的淋巴细胞转变为特异性致敏淋巴细胞,从而激发受体细胞介导的免疫反应。转移因子刺激淋巴母细胞转化为成熟的淋巴细胞,促进巨噬细胞移动至抗原聚集处,促进抗体产生,增强体液免疫。
转移因子免疫调节试验一(巨噬细胞):
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结论:转移因子均可以提高动的巨噬细胞吞噬均数、吞噬指数以及K比值,表明可提高动物的非特异性免疫力。
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结论:转移因子在提高巨噬细胞吞噬能力的同时,还增加了其还原能力,有助于自由基的清除;同时,诱导巨噬细胞分泌一氧化氮和白介素,进一步促进机体的免疫反应,提高抵抗力。
转移因子免疫调节试验二(T、B淋巴细胞)
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结论:转移因子能显著促进T淋巴细胞活化和数量增加的作用。
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结论:试验组淋巴细胞EAC成环细胞数远远高于对照组,表明转移因子可活化B细胞和增加B细胞数量的作用。